恒定自然杀伤T（iNKT）细胞上的表达及意义

　　T细胞免疫球蛋白粘蛋白3（T cell immunoglobulin mucin-3,Tim-3）是Tim家族的一员，作为免疫负调控分子对免疫耐受起关键作用，与配体半乳凝素-9（galectin-9）作用可诱导 Tim-3+T细胞死亡。肿瘤免疫逃逸是肝细胞癌发病机理中重要的一环，CD1d限制性恒定自然杀伤T细胞（iNKT）与免疫效应细胞相互作用参与肿瘤免 疫。已有实验证明Tim-3在慢性感染及肿瘤个体耗竭的CD8+T细胞上表达上调，而最近有研究发现Tim-3/galectin-9信号通路介导乙型肝 炎病毒（HBV）相关肝细胞癌（HCC）患者T细胞的功能失调及调控小鼠非酒精性脂肪肝肝脏iNKT细胞的稳态。本研究中我们检测了Tim-3在HBV相 关HCC患者外周血和肝组织中iNKT细胞上的表达，以揭示其在HCC的发生发展中的作用。方法：收集15例手术切除的HBV相关HCC患者癌灶、癌旁组 织作为病例组，及7例手术切除的肝血管瘤患者瘤旁正常肝脏组织作为对照组，采用机械研磨法获取肝细胞悬液，经Percoll密度梯度分离肝脏浸润淋巴细 胞；同时采集两组患者外周血分析单个核细胞群。标本标记荧光素偶联的CD3、CD4、CD8、Vα24Jα18TCR（6B11单克隆系）及Tim-3抗 体，在溶血素处理后，经BD FACSAria Ⅱ流式细胞仪检测，分析Tim-3在HBV相关HCC癌灶、癌旁组织和正常肝组织及外周血中CD3+iNKT细胞及各亚群CD4+iNKT、 CD8+iNKT和（CD4-CD8-）DN iNKT细胞上的表达。结果：1Tim-3在HBV相关HCC癌灶组织中的CD3+、CD4+及CD8+T细胞上表达增高。与癌旁组织及正常肝脏组织比 较，Tim-3在癌灶组织中的CD3+、CD4+及CD8+T细胞上表达显著增高（Tim-3+CD3+T细 胞：2.729±1.436%vs.0.729±0.373%和0.600±0.265; Tim-3+CD4+T细胞：3.343±1.976vs.1.500±0.896%和1.086±0.367%; Tim-3+CD8+T细胞：3.300±1.854vs.1.300±0.635%和0.657±0.244%, P<0.05）。2iNKT及各亚群细胞频数在HBV相关HCC患者癌灶、癌旁组织和肝血管瘤患者正常肝脏组织及在这两组外周血中的变化。癌灶组织 中CD3+iNKT细胞频数较癌旁组织和正常肝脏组织中的细胞频数显著降低（0.123±0.089%vs.0.227±0.140%和 0.462±0.145%, P<0.05）。癌灶组织中亚群CD8+iNKT和（CD4-CD8-）DN iNKT细胞频数显著低于癌旁组织中两者的细胞频数（14.8±9.4%vs.25.2±10.8%;24.4±14.0%vs.41.3±12.6%, P<0.05），而癌灶组织中亚群CD4+iNKT细胞频数则显著高于癌旁组织中的细胞频数（37.3±12.9%vs.24.3±7.2%, P<0.05）。相较肝血管瘤患者外周血，HBV相关HCC患者外周血中CD3+iNKT细胞频数显著降低 （0.152±0.362%vs.0.373±0.200%, P<0.05）。HBV相关HCC与肝血管瘤患者外周血中iNKT亚群细胞分布则无显著差异。3Tim-3在HBV相关HCC癌灶、癌旁组织和肝血 管瘤患者正常肝脏组织中iNKT及各亚群细胞上的表达水平。与正常肝脏组织和癌旁组织比较，Tim-3在癌灶组织中的CD3+iNKT细胞上表达显著增高 （51.2±8.3%vs.18.4±3.4%和24.1±4.5%, P<0.05）；且Tim-3的表达主要在癌灶组织中的CD4+iNKT亚群细胞上显著增高（62.0±6.9%vs.35.4±4.2%和 36.8±6.5%, P<0.05）。结论：1与正常肝脏组织及HBV相关HCC癌旁组织比较，Tim-3在HBV相关HCC癌灶组织中的CD3+T细胞及CD4+和 CD8+T亚群细胞上富集。2HBV相关HCC患者外周血、癌灶及癌旁组织中CD3+iNKT细胞频数较对照组降低。值得注意的是亚群分布的差异：与癌旁 组织比较，癌灶组织中CD4+iNKT细胞百分数增高，而CD8+iNKT及（CD4-CD8-）DN iNKT细胞百分数则下降。3与正常肝脏组织及HBV相关HCC癌旁组织相比较，Tim-3在HBV相关HCC癌灶组织中的iNKT细胞上表达增高，且以 Tim-3+CD4+iNKT细胞为主。因此Tim-3可能通过抑制iNKT细胞参与了HBV相关HCC的免疫调控。