HPLC色谱柱选择之相似色谱柱寻找

注：色谱技术突飞猛进，各种色谱柱层出不穷，不完全统计C18色谱柱的填料就有上百种，到底该如何选用色谱柱!？

前阵子有朋友问我借一款色谱柱，我也没有，具体询问后得知，对方做仿制药，手头没有药典上规定的色谱柱，又急于想看看现有工艺下的原料药是否与原研药一致。

这让我想到了分析方法开发中也会遇到类似的情况，手头没有文献报道的色谱柱，怎么办？ 方法开发有时还需要尽量选用色谱行为差距较大（最好是正交）的不同色谱柱，用于证明所开发的方法已经将所有杂质分开，主峰中没有其他共流出组分。

此时就需要寻找相似色谱柱替代一下。

方法如下：

1、土豪的做法是加急买一个完全一样的！！！我工作的地方倒是不差钱但是采购周期实在不敢恭维。

2、各大色谱柱公司官网都有自己公司色谱柱与其他公司色谱柱的比较，还有按照USP Columns种类分类的目录。如下图：

3、如果药物已经上了USP，还可以通过美国药典找到合适的色谱柱

网址https://www.usp.org/usp-nf/new-chromatographic-columns-online-database，这个需要注册后才能使用

下面我以Somatropin为例搜索一下看看结果如何，见下图

看到了吧！这里把一些色谱柱信息都列上了，而且都是经过验证可用的色谱柱。

把所有的色谱柱都归类的数据库，这是个相当庞大的工程，幸运的是已经有人完成了这个工程并形成了一个免费供大家使用的数据库（需要注册）。

注：这个数据库我们可以参考，但绝对不代表USP会认可这种色谱柱替换，我们还需要方法验证证明这种替换是可行的。

尽管如此，这个数据库还是非常有价值的，至少我们在分析方法开发过程中会给我们很多帮助。我们会了解到不同色谱柱的各种特性。

现在介绍给大家

网址：https://apps.usp.org/app/USPNF/columnsDB.html

第一部分 USP数据库 如下图

简单操作只需在 1 的下拉菜单中选择一款色谱柱，网页会自动按照色谱柱的相似性生成列表2

其中

Rank：是根据与所选色谱柱相似性排序，

F：Column comparison function (F)，色谱柱比对函数，值越低代表相似性越好

Column：色谱柱名称

Hy：Hydrophobicity (Hy)疏水性，是用于评价色谱柱对疏水性化合物（如：乙苯）的保留能力

CTF:Chelating Tailing Factor (CTF) 用于评价硅胶填料中残余金属情况。值越大代表残留的金属较多，表现为quinizarin的峰形严重拖尾，值越小，quinizarin的峰形越对称。

CFA：Capacity Factor Amitriptyline (CFA)是碱性化合物Amitriptyline的容量因子。

TFA：Tailing Factor of Amitriptyline (TFA) 是碱性化合物Amitriptyline的拖尾因子，值越大，拖尾越严重，代表硅醇基的活性高，色谱柱的封端处理不完全，值越小，峰形越对称，硅醇基活性越低，说明封端越彻底。

BD：Bonding density (BD) in μmol/m2 是硅胶表面键合相的浓度，一般值越大代表键合的固定相越多，柱子的载量越大。与值低的色谱柱比较，对相同化合物的保留能力更强。

USP Designation：USP质谱柱分类

Manufacture：色谱柱厂家名称

注：我们可以根据自己要分析目标化合物特性勾选不同的参数，比如目标化合物是疏水性强的化合物，就勾选Hy， 如果含有碱性基团，再勾选CFA TFA， 如果对化合物的保留时间要求比较高如LC-MS分析极性化合物，这是可以考虑用BD值高的色谱柱，LC-MS分析非极性化合物强的化合物，就选用BD值低的色谱柱。

第二部分 PQRI数据库如下图

基本用法与上一个数据库相同，多了2 的选项，可以限定样品的酸碱性，及流动性pH，这样可以跟精确的找到相似色谱柱。

USP数据库已反相色谱柱为主，这个色谱柱的种类比较全面，而且还提供筛选不用色谱柱数据。

为便于大家操作，还制定了个小的视频文件

另外赠送个蛋白消光系数计算的小视频

　　如果你觉得这个对你有帮助，请帮助转发给那些可能需要此信息的人，谢谢！

　　来源：生物药物质量评价

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